一、环境控制：确保培养条件精准稳定

1. 温度控制
   • 设定范围：通常为37℃（哺乳动物细胞培养标准温度），波动范围需≤±0.1℃。
   • 校准频率：每3-6个月用标准温度计校准一次，避免传感器漂移。
   • 异常处理：若温度报警，立即检查加热元件、温度传感器及通风系统，防止细胞因温度波动死亡。
2. 二氧化碳浓度控制
   • 设定范围：5% CO₂（平衡培养基pH），波动范围需≤±0.2%。
   • 气源要求：使用高纯度CO₂钢瓶（≥99.99%），避免杂质（如O₂、N₂）干扰。
   • 校准方法：每月用标准气体（如4.9% CO₂）校准红外传感器，或通过血气分析仪验证培养基pH。
3. 湿度控制
   • 设定范围：95%相对湿度（防止培养基蒸发），需通过水箱或湿度发生器维持。
   • 补水周期：每周检查水箱水位，避免干烧损坏加热元件。
   • 污染风险：使用无菌水或添加抑菌剂（如0.1% CuSO₄），防止霉菌滋生。

二、操作规范：避免人为污染与实验误差

1. 物品放置与灭菌
   • 培养皿/瓶摆放：保持10%-15%空隙，确保气流均匀，避免局部温度/CO₂浓度异常。
   • 预灭菌处理：所有放入培养箱的物品（如培养板、移液管）需经高压蒸汽灭菌或75%乙醇擦拭消毒。
   • 开门时间控制：单次开门时间≤30秒，减少内外环境交换导致的参数波动。
2. 细胞操作流程
   • 超净台配合：在生物安全柜内完成细胞传代、换液等操作，避免直接在培养箱内操作。
   • 培养基预平衡：将培养基放入培养箱至少2小时，使其温度与CO₂浓度与箱内环境一致。
   • 标记与记录：清晰标注细胞名称、代数、培养日期，并记录温度、CO₂浓度等参数。
3. 污染预防措施
   • 分区管理：将不同细胞系或实验项目分区域放置，避免交叉污染。
   • 定期检测：每月用含酚红的培养基检测污染（如细菌污染会导致pH下降，培养基变黄）。
   • 应急处理：发现污染后，立即用75%乙醇擦拭箱体内部，并高温高压灭菌所有可拆卸部件。

三、维护保养：延长设备寿命，保障性能稳定

1. 日常清洁
   • 清洁频率：每周用75%乙醇擦拭箱体内壁、搁板及水盘。
   • 顽固污渍处理：对蛋白类污染物，可用1% SDS溶液浸泡后擦拭。
   • 避免腐蚀：禁止使用含氯消毒剂（如84消毒液），防止损坏不锈钢内胆。
2. 深度维护
   • 传感器校准：每6个月联系厂家校准温度、CO₂及湿度传感器。
   • 风道清理：每年拆解风扇及风道，清除灰尘及纤维堵塞，确保气流循环顺畅。
   • 门封检查：每月检查门封条完整性，更换老化或破损的密封条。
3. 长期停用管理
   • 断电前处理：清空水箱，用75%乙醇擦拭箱体，保持门缝微开（约1cm）防止霉菌滋生。
   • 重启流程：重新启用前，先运行空箱24小时，待参数稳定后再放入细胞。

四、安全防护：降低人员与设备风险

1. 气体安全
   • 气瓶固定：CO₂钢瓶需用专用支架固定，避免倾倒导致高压气体泄漏。
   • 泄漏检测：安装CO₂报警器（阈值设为1.5%），定期检查气路连接处是否漏气。
   • 应急处理：若发生泄漏，立即关闭气瓶阀门，打开门窗通风，禁止使用明火或电器开关。
2. 电气安全
   • 接地保护：确保培养箱接地良好，避免漏电风险。
   • 过载保护：避免与其他大功率设备共用同一电源插座，防止电路过载。
3. 生物安全
   • 废弃物处理：含细胞的培养基需经121℃高压蒸汽灭菌30分钟后丢弃。
   • 个人防护：操作时佩戴实验服、手套及护目镜，防止培养基溅入眼睛或皮肤。

五、常见问题与解决方案

六、进阶建议

1. 数据记录与追溯：使用带数据存储功能的培养箱，或连接实验室信息管理系统（LIMS），实现参数实时监控与历史记录查询。
2. 节能模式选择：非工作时间启用节能模式（如降低温度至4℃），减少能耗同时缩短恢复时间。
3. 备件储备：常备门封条、温度传感器等易损件，避免突发故障导致实验中断。