最大吸收波长的测定和选择

由图1 可知，胡桃醌的最大吸收波长出现在250 nm 左右，此时受干扰较少。因此选择250 nm 为测定波长。

2． 2 流动相组成的影响试验

从图2 可以看出，随着水的比例增加，流动相的极性增大，保留时间也延长。当甲醇的体积分数小于50% 时，分析时间过长，峰形开始逐渐变差。综合以上情况，选用甲醇的体积分数为50%( 即甲醇与水体积比为1 ∶ 1) 。

2． 3 pH 值的影响试验

流动相中水相的pH 值在2 ～ 7 范围对胡桃醌的保留时间( 图3) 和峰面积都没有太大的影响，但当pH 值为4 时，峰型较好，因此本试验中选取水相的pH 值为4。

2． 4 柱温的选择试验

试验结果( 图4) 表明: 随着温度升高，各物质之间的分离效果有所提高，当温度高于30 ℃，分离效果随着温度升高变化不再明显，考虑到色谱柱使用温度条件，选择柱温30 ℃。

2． 5 标准曲线的建立

以质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作工作曲线，得到图5，对曲线进行线性拟合，得到胡桃醌含量的标准曲线方程为y = 598 860x － 49 983 ( r2 = 0． 999 1 ) ，表明胡桃醌在10 ～ 150 μg /mL 范围内线性关系良好。

2． 6 精密度试验

由表1 可知，高、中、低3 个不同水平的标准品溶液ＲSD值均小于2%，表明仪器及进样的精密度良好。表1 精密度试验结果样品浓度( μg /mL)

测定浓度( μg /mL)1 2 3 4 5 平均ＲSD( %)

10 9． 73 9． 82 9． 79 10． 21 9． 87 9． 88 1． 29

50 49． 81 50． 33 49． 83 48． 97 49． 82 49． 75 0． 63

100 99． 82 98． 76 100． 09 99． 33 98． 67 99． 33 0． 49

2． 7 稳定性试验

由表2 可知，所测得浓度的ＲSD 为2． 5%，表明该方法在10 h 之内稳定性较好，即样品溶液可以在10 h 之内测定，基本上可以满足试验要求。