Ｓｅｖａｇ法脱蛋白

２．１．１ 震荡次数由图１可知，随着震荡次数的增加，多糖损失率和蛋白去除率均呈上升趋势，当震荡次数达到４～５次时，蛋白去除率相差不大，但震荡次数为４次时的多糖损失率明显低于５次时，所以选择４次为最佳震荡次数。

２．１．２ 震荡时间随着震荡时间的增加，多糖损失率和蛋白去除率的含量呈上升的趋势（图１），当震荡时间为２０ｍｉｎ时，蛋白去除率已达到３８．９９％，再延长震荡时间蛋白去除率略有增加，但不明显，而多糖损失率在震荡时间为２０ｍｉｎ时相对较低，再延长震荡时间多糖损失率有所增加，所以选择震荡时间为２０ｍｉｎ。

２．１．３ 试剂用量随着Ｓｅｖａｇ试剂用量的增加，多糖损失率和蛋白去除率均逐渐增大（图１），当试剂用量为多糖溶液体积的１／２时蛋白去除率已达到最大值（４３．１０％），所以选择Ｓｅｖａｇ试剂用量为粗多糖溶液体积的１／２。

２．１．４ Ｓｅｖａｇ 法脱蛋白的工艺验证试验在Ｓｅｖａｇ试剂用量为粗多糖溶液体积的１／２，震荡时间为２０ｍｉｎ，震荡次数为４次的条件下对猴腿蹄盖蕨多糖进行脱蛋白试验，其蛋白去除率为６３．１５％，多糖损失率为１４．５３％。

２．２ ＴＣＡ法脱蛋白

　　由图２可知，当ＴＣＡ 在粗多糖溶液中的浓度逐渐升高时，多糖损失率和蛋白去除率也逐渐升高，当ＴＣＡ在粗多糖溶液中的浓度达到３．０％时，蛋白去除率已达到较高值（４６．１３％），再提高ＴＣＡ的浓度，蛋白去除率增加趋势平缓，且在该浓度下多糖损失率明显低于ＴＣＡ浓度为３．５％、４．０％时，所以将ＴＣＡ浓度固定为３．０％。在该浓度下，当震荡次数达到３ 次时，蛋白去除率已达到较高水平，为

５６．２５％，再增加震荡次数，去除率增加不明显，而且导致多糖损失率提高。

２．３ 酶法脱蛋白

２．３．１ 木瓜蛋白酶加入量由图３可知，随着木瓜蛋白酶加入量的增加，多糖损失率和蛋白去除率逐渐升高，但增加趋势平缓，木瓜蛋白酶的加入量对猴腿蹄盖蕨多糖的脱蛋白效果影响不明显，在木瓜蛋白酶加入量为０．０２ｇ时，多糖损失率和蛋白去除率分别为９．５１％和６２．０４％。故木瓜蛋白酶的加入量在０．０２ｇ左右较好。

２．３．２ 酶解温度随着酶解温度的升高，多糖损失率和蛋白去除率均呈现降低的趋势，由图３可知，酶解温度为４０℃时，蛋白去除率和多糖损失率为６２．０３％、９．５１％，效果最好。

２．３．３ 酶解时间由图３可知，酶解反应时间对多糖损失率和蛋白去除率影响较小，为了缩短反应时间，选择酶解反应时间为３０ｍｉｎ，在该条件下，其蛋白去除率和多糖损失率为６１．９８％、９．４３％，效果比较理想。

２．４ 酶法与Ｓｅｖａｇ法联用结果将酶法与Ｓｅｖａｇ 法联用后，蛋白去除率为７４．１８％，多糖损失率为１２．１１％，表明联合法较单

一方法脱蛋白效果好，且多糖损失率增加不明显。

２．５ 酶法与ＴＣＡ 法联用脱蛋白试验将酶法与ＴＣＡ法联用后，蛋白去除率为７６．３６％，多糖损失率为１１．４３％。

２．６ 不同试验方法的对比以蛋白去除率为主要指标，多糖损失率为次要指标，对上述５种方法的结果进行比较可知（表），酶法与ＴＣＡ 法联用蛋白去除率最高，且多糖损失率相对较低，故选择酶法与ＴＣＡ 法联用对猴腿蹄盖蕨多糖进行脱蛋白，并应用该方法对猴腿蹄盖蕨多糖进行了３次脱蛋白，其蛋白去除率分别为７６．３９％、７６．４５％、７６．６７％，平均为７６．５０％，多糖损失率分别为１１．３７％、１１．６８％、１２．４０％，平均为１１．８２％。

表不同方法的猴腿蹄盖蕨多糖的脱蛋白结果比较

蛋白去除率／％ ６３．１５　５６．２５　６１．９８　７６．５　７４．１８

多糖损失率／％ １４．５３　１１．３７　９．４３　１１．８２　１２．１１

３ 结论与讨论

试验对猴腿蹄盖蕨多糖的脱蛋白工艺进行了相关研究，确定了猴腿蹄盖蕨多糖的脱蛋白工艺条件，结果表明，最佳脱蛋白工艺为酶法与ＴＣＡ法联用，即加入０．０２ｇ木瓜蛋白酶，４０℃水浴反应３０ｍｉｎ后，沸水中灭酶１０ｍｉｎ，冷却至室温，４　０００ｒ／ｍｉｎ离心，去变性沉淀，取上清液加入３％ＴＣＡ 试剂振荡３次，每次２０ｍｉｎ，震荡后静置１ｈ，４０００ｒ／ｍｉｎ离心１５ｍｉｎ。在该条件下猴腿蹄盖蕨多糖脱蛋白去除率为７６．５０％，多糖损失率为１１．８２％。该试验结果为猴腿蹄盖蕨多糖的生产提供了理论的依据。