1材料与方法

1.1 材料及仪器

1.1. 1 丙烯酞胺

1.1.2 双丙烯酞胺

1.1.3 过硫酸按

1.1.4 四甲基乙二胺

1.1.5 十二烷基硫酸钠

1.1.6 牛清血蛋白

1.1.7 曙红Y

1.1.8 甲醇

1.1.9 冰醋酸

1.1.10 电极缓冲条

1.1.11 电泳槽

1.1.12 P o w E R 1 5 0 三恒电源

1.2 方法

1. 2.1 样品制备  将加有s D s 的样品溶液在10 ℃ 水浴中保温5而n , 冷却后在2 5 邻l 样品加1。闪澳酚蓝(0.01 % ) 和10 川二硫苏糖醉。

加样前充

分混合溶液。

1 .2 2 制备凝胶板7.5% 聚丙烯酞胺凝胺(T = 7.5%,c ~2.6% ) 含S D S O. 28 的胶3 0m l 灌注1 2 5 义2 5 0~ 硅化玻璃板上, 待聚合后使用。

1 .2 3 加样将凝胶板水平放置电泳槽冷却板上, 距阴极侧1、5 一2.oc m 处加样品。

1 .2 4 电泳待样品完全渗入凝胶后, 将充满缓冲液的电极缓冲条水平放在凝胶板的两极, 与电极紧密接触, 电流30 mA, 电泳1 0min , 温度为5~ 6 ℃ 。

1.2.5 曙红Y 染色电泳结束后立即将凝胶浸入冰醋酸一甲醇混合液中( 10 % 冰醋酸,40 % 甲醇), 室温下振荡浸泡1 0而n ; 凝胶用蒸馏冲洗l 而山然后放置梁色液中(1 写曙红Y, 切% 甲醇,0.5~ 0.5 %醋酸混合后过滤, 用前临时配制) ,室温下振荡染色sm in。染色后的凝胶蒸馏水冲洗s m in ; 再放入冰醋酸一甲醇混合掖中10 秒, 取出用蒸馏水冲洗二次, 即可见清楚的显色带.

2 结果

血清样品经SSD 一P A G E 电泳, 曙红Y染色与考马斯蓝染色灵敏度比较, 结果显示本法所得电泳图谱优于考马斯亮蓝。将牛血清血蛋白稀释成300ng、200ng、10 0 ng、5 0ng、2 5ng、15 ng、1 0ng、5ng最低检测灵敏度试验, 其极限值为1如名左右。明显好于考马斯亮蓝染色法。

3 讨论曙红Y 是一典型的四澳荧光素, 在酸性条件下, 转变成为二氢荧光素。

它的芳香环与蛋白质的基团间的琉水相互作用及经基与蛋白质肤链间形成氢键而使蛋白质染色。不仅能与一般蛋白质染色, 也能与糖蛋白质染色。

本法采用水平薄层聚丙烯酸胺凝胶电泳, 加样数量多, 同时有利相互比较等优点同时采用电极缓冲条既方便又节省大量配制电极缓冲液。曙红丫染色系新近发展起来的一种蛋白质快速染色法, 灵敏度好, 操作简便, 染色时间短, 试剂便宜, 值得推广应用。